جداسازی، کلونینگ و بیان ژن فاکتور vii انعقادی نوترکیب انسانی در رده سلولی cho

نویسندگان

مهریار حبیبی رودکنار

mehryar habibi roudkenar p.o.box: 14665-1157, tehran, iran.مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران راحله حلبیان

r halabian مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایرانسازمان اصلی تایید شده: سازمان انتقال خون ایران (blood transfusion research center) ناصر شاگردی اسماعیلی

n shagerdi esmaili مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایرانسازمان اصلی تایید شده: سازمان انتقال خون ایران (blood transfusion research center) آرزو اودی

a oodi مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایرانسازمان اصلی تایید شده: سازمان انتقال خون ایران (blood transfusion research center) ناصر مسروری

چکیده

جداسازی، کلونینگ و بیان ژن فاکتور vii انعقادی نوترکیب انسانی در رده سلولی cho راحله حلبیان1، ناصر شاگردی اسماعیلی2، آرزو اوودی2، ناصر مسروری3، دکتر ناصر امیری زاده4، دکتر کامران موسوی حسینی5، دکتر احمد قره باغیان6، دکتر حوری رضوان7، دکتر محمد علی جلیلی8، دکتر مهریار حبیبی رودکنار9 چکیده سابقه و هدف فاکتور vii ، یک گلیکوپروتئین پلاسمایی است که در آبشار انعقادی تشکیل فیبرین، شرکت دارد. فاکتور vii در مسیر انعقادی نقش مهمی داشته و آغازگر مسیر خارجی انعقاد است. هدف اساسی این مطالعه جداسازی و کلونینگ فاکتور vii نوترکیب انسانی و بیان آن در رده سلولی یوکاریوتی cho جهت بیان فاکتور vii نوترکیب(fvii) بود. مواد وروش ها مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. ابتدا cdna ژن فاکتور vii از رده سلولی کبد انسان(hepg2) جدا شده و در وکتور(+) 1/3 pcdna کلون شده سپس وکتور نوترکیب به داخل سلول های cho ترانسفکت شد. در نهایت، یک کلون سلولی که به طور پیوسته فاکتور vii را بیان می کند تثبیت شد. بیان فاکتور vii نوترکیب توسط روش های rt-pcr ، الایزا، sds-page و وسترن بلات مورد بررسی قرار گرفت. هم چنین تایید فعالیت بیولوژیکی فاکتور vii نوترکیب توسط آزمایش pt و ایجاد لخته در پلاسمای فاقد فاکتور vii صورت گرفت. یافته ها نتایج به دست آمده نشان دهنده کلونینگ و بیان موفقیت آمیز ژن فاکتور vii بود. پس از 3 هفته کشت سلول های cho در حضور جنتیسین، کلون سلول های پایدار به دست آمد. نتایج آزمایش های rt-pcr ، الایزا، sds-page و وسترن بلات حاصل از کلون ها، نشان دهنده بیان این پروتئین در رده سلولی cho بود. کاهش 3 الی 4 برابری در زمان انعقاد نشان دهنده وجود فعالیت بیولوژیکی فاکتور vii نوترکیب بیان شده بود. نتیجه گیری سالانه حدود 4000 الی 6000 ویال(33600 تا 50400 میلی گرم) از این فرآورده وارد کشور می شود که دولت را متحمل هزینه بسیار بالایی می کند. بنابراین تولید فاکتور vii نوترکیب با استفاده از فناوری dna نوترکیب در سطح آزمایشگاهی، می تواند اولین گام در راه فایق آمدن بر مشکلات فوق باشد.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

جداسازی، کلونینگ و بیان ژن فاکتور VII انعقادی نوترکیب انسانی در رده سلولی CHO

جداسازی، کلونینگ و بیان ژن فاکتور VII انعقادی نوترکیب انسانی در رده سلولی CHO راحله حلبیان1، ناصر شاگردی اسماعیلی2، آرزو اوودی2، ناصر مسروری3، دکتر ناصر امیری‌زاده4، دکتر کامران موسوی حسینی5، دکتر احمد قره‌باغیان6، دکتر حوری رضوان7، دکتر محمد علی جلیلی8، دکتر مهریار حبیبی رودکنار9 چکیده سابقه و هدف فاکتور VII ، یک گلیکوپروتئین پلاسمایی است که در آبشار انعقادی تشکیل فیبرین، شرکت دارد....

متن کامل

کلونینگ cDNA فاکتور VII انعقادی حاصل از رده سلولی هپاتوما

Abstract Background: Factor VII, is a coagulant protease it begins the proteolytic cascade reactions and produces thrombin. The use of recombinant human factor VII, (rhFVII) is effective for the treatment of patients with hemophilia A or B. It is a target for gene therapy. This study was done to clone factor VII from HepG2 cell line. Methods: RNA was extracted from the hepatoma, (HepG2), ...

متن کامل

کلونینگ cdna فاکتور vii انعقادی حاصل از رده سلولی هپاتوما

چکیده سابقه و هدف: فاکتور هفت، پروتئاز انعقادی مسئول شروع آبشار واکنش های پروتئولیتیک است که به تولید ترومبین و در نتیجه تشکیل لخته می انجامد. به دلیل به کارگیری موفق آن در کنترل هموفیلی و نقش احتمالی آن در فرآیندهای مختلف سلولی، فاکتور هفت به عنوان هدف ژن درمانی و سایر مشکلات بالینی مورد توجه قرار گرفته است. در این مطالعه، رده سلولی hepg2 برای کلون فاکتور vii مورد استفاده قرار گرفت. روش بررسی:...

متن کامل

کلون سازی و بیان ژن هیرودین نوترکیب در رده سلولی CHO

هیرودین پروتئینی به طول 66-65 اسیدآمینه می باشد که از غدد بزاقی زالو ترشح و به عنوان یک داروی ضدانعقاد مطرح است. این دارو مهارکننده بسیار قوی ترومبین بوده و در ممانعت از ترومبوسهای عروقی موثر است. هدف از این تحقیق بررسی بیان ژن هیرودین در سلول های  CHO به عنوان یک سلول یوکاریوتی بود. در مطالعه حاضر، قطعه 221 بازی ژن هیرودین در وکتور pcDNA3.1(+) کلون گردید. وکتور نوترکیب هیرودین در سلول CHO با ا...

متن کامل

همسانه‌سازی و بیان ژن نوترکیب CD40Lانسانی در رده سلولی HEK293

چکیده سابقه و هدف CD40L ، پروتئینی غشایی و یکی از اعضای خانواده TNF است که نقش مهمی در انتقال پیام سلولی در ایمنی ذاتی و تطبیقی دارد. از آن جایی‌که این پروتئین نقش خود را از طریق تجمع گیرنده در سطح سلول هدف ایفا می‌کند، به ‌نظر می‌رسد فرم مالتی‌‌مری آن بتواند اثر قوی‌تری نسبت به فرم طبیعی ترایمری ایجاد کند. بر ‌این اساس در این مطالعه کلونینگ و بیان فرم کایمری و دودکامری CD40L محلول، از طریق پر...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید


عنوان ژورنال:
فصلنامه پژوهشی خون

جلد ۶، شماره ۱، صفحات ۱-۱۱

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023